一、細(xì)胞大小測(cè)定也稱顯微測(cè)微實(shí)驗(yàn), 主要是利用目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺配合使用對(duì)細(xì)胞大小進(jìn)行測(cè)定。
A:鏡臺(tái)測(cè)微尺:是一種特制的載玻片,中央有一個(gè)全長(zhǎng)1 mm 的刻度標(biāo)尺,將1 mm 等分成100 個(gè)小格,每格長(zhǎng)度為10 μm,用它來(lái)校正標(biāo)定目鏡測(cè)微尺每小格的長(zhǎng)度。
B:目鏡測(cè)微尺:是一塊可放在目鏡內(nèi)的圓形薄片,中央有刻度,并被分為50 小格,每小格的長(zhǎng)度隨物鏡放大倍數(shù)的大小而變動(dòng)。測(cè)量細(xì)胞大小之前,預(yù)先用鏡臺(tái)測(cè)微尺來(lái)標(biāo)定某一物鏡放大倍數(shù)下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度,再以它作為測(cè)量細(xì)胞的尺度。
二、細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行操作,其構(gòu)造和計(jì)數(shù)原理是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
血球計(jì)數(shù)板:
由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成,玻片中有4 條下凹的槽,構(gòu)成3 個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面刻有一個(gè)方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9 個(gè)大方格,其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室,供計(jì)數(shù)用。這一大方格的長(zhǎng)和寬各為1 mm,深度為0.1 mm,其體積為0.1 mm3。經(jīng)過(guò)恰當(dāng)稀釋的細(xì)胞懸液,加到血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中,在顯微鏡下逐格計(jì)數(shù),由于計(jì)數(shù)室的容積是固定的,故可將在顯微鏡下計(jì)得的菌體細(xì)胞數(shù)換算成單位體積的細(xì)胞數(shù)量, 經(jīng)過(guò)此方法可測(cè)得樣品中細(xì)胞總和。
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)利用小方格邊長(zhǎng)50 μm 進(jìn)行標(biāo)定目鏡測(cè)微尺時(shí),易產(chǎn)生2 種不同的結(jié)果。有些人目鏡測(cè)微尺兩端重疊時(shí)用的是靠近中方格的小方格,而計(jì)數(shù)室的特點(diǎn)就是中方格的邊緣線都為雙線, 靠近中方格的小方格的一邊也為雙線,導(dǎo)致結(jié)果不一致。所以要正確的利用單線小方格的邊長(zhǎng)進(jìn)行標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。
2)充分利用血球計(jì)數(shù)板, 不僅利用其小方格邊長(zhǎng)的固定值,同時(shí)也利用其充當(dāng)載玻片,在計(jì)數(shù)室內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),在計(jì)數(shù)室內(nèi)外都可以進(jìn)行細(xì)胞大小的測(cè)定。
3)細(xì)胞大小測(cè)定時(shí),觀察酵母細(xì)胞應(yīng)選擇代表性的細(xì)胞, 不要選擇剛剛出芽脫落下來(lái)的幼齡酵母,也不要選擇有明顯吸水膨脹的老齡酵母,觀察時(shí)一般選擇5~10 個(gè)典型酵母細(xì)胞求平均值。
4)細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)避免重復(fù)計(jì)數(shù), 減少誤差, 嚴(yán)格按照“ 計(jì)左不計(jì)右,計(jì)上不計(jì)下” 的原則, 遇到有出芽的酵母, 只有當(dāng)芽體與母細(xì)胞一樣大時(shí)計(jì)為2 個(gè)。
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